Wie wird die Anzahl der Zellen zu zählen

Mikrobielle Experimente erfordern oft, dass wir wissen, wie viele Bakterien, zum Beispiel, sind vorhanden. die Anzahl der mikrobiellen Zellen zu wissen, ob Zellen hilft, um anzuzeigen, wachsen oder zu sterben, und es hilft Experimente von Tag zu Tag im Einklang zu sein.

Methoden zur Bestimmung der Anzahl von Zellen, die leicht zu entziffern und genau sind in der Mikrobiologie-Labors täglich verwendet. Dazu zählen direkte Verfahren, in denen Kolonien direkt gezählt werden und indirekte Methoden, bei denen eine Schätzung der Anzahl der Zellen hergestellt wird.

Direkte Methoden der Zellzählung

Bestimmen der Anzahl von Bakterienzellen, die in einer Probe am Leben sind geschieht mit Lebensfähigkeitszählungen. Jede Methode zur Berechnung der praktikable Anzahl von Organismen nutzt die Tatsache, dass, wenn eine Suspension von Bakterien auf festem Medium plattiert wird, jede bakterielle Zelle leben werden wachsen, um eine Kolonie zu bilden, die groß genug ist, zu sehen.

Wenn die Konzentration von Bakterien in einer Probe hoch ist, muß es verdünnt genug sein, so daß die Kolonien voneinander verschieden sind, die mit getan Reihenverdünnung.

In der Figur wird eine Kultur der Bakterien durch Zugabe eines festen Volumens mit dem ersten Rohr (die erste Verdünnung) und dann unter ein festgelegtes Volumen von der ersten Röhre und Hinzufügen zu der zweiten Röhre (die zweite Verdünnung) wiederholt verdünnt. Dies wird mehrere Male wiederholt (weshalb es heißt seriell Verdünnung) in dem Bemühen, die ursprüngliche Bakterienkultur zu verdünnen.

Ein kleines Volumen jeder Verdünnung wird dann auf Agar ausplattiert und einzelne Bakterienzellen bilden jeweils eine Kolonie. Zunehmende Verdünnungen in einer abnehmenden Anzahl von Bakterien führen vorhanden und daher eine abnehmende Anzahl von Kolonien auf jeder Agarplatte. Die Anzahl der Kolonien wird dann verwendet, rückwärts zu berechnen, die genaue Anzahl von Zellen zu bestimmen, die in der ursprünglichen Probe vorhanden waren.

Um die Anzahl der lebensfähigen Zellen in der Originalprobe, die Anzahl der Kolonien vorhanden, nachdem die Platten wurden inkubiert Berechnung wird mit dem Verdünnungsfaktor multipliziert. Die Anzahl der Zellen in einer Probe wird üblicherweise als koloniebildende Einheiten (CFU) pro Volumeneinheit (in diesem Fall ml) oder CFU / ml ausgedrückt.

Wenn die Anzahl von Zellen in einer Probe sehr niedrig sind, wie in Seewasser kann ein großes Volumen der Probe durch einen Filter geleitet werden, das dann mit dem geeigneten Medium kultiviert wird Kolonien der Mikrobe von Interesse zu produzieren. In diesem Fall wird die Anzahl der Kolonien durch das Volumen der Probe gefiltert unterteilt.

Wenn beispielsweise 5 Liter (L) des Sees Wasser gefiltert wurden und erschien 100 Kolonien nach der Inkubation, dann ist die ursprüngliche Anzahl der Bakterien im Wasser war 100 Kolonien / 5 L = 20 KBE / L.

Eine andere Möglichkeit, die Anzahl der Zellen in einer Probe zu zählen ist durch direkte mikroskopische zählt. Mit diesem Verfahren werden alle Zellen in der Probe - ob lebend oder tot - gezählt werden, aber es gibt Ihnen eine sofortige Schätzung der Bakterienzahlen ohne die Notwendigkeit, eine Probe für 24 Stunden inkubiert oder mehr.

Indirekte Methoden der Zellzählung

Obwohl sie nicht so präzise, ​​sind indirekte Methoden schneller und bequemer als direkte Methoden bei der Schätzung der Anzahl von Mikroben in einer Probe.

Trübheit ist die Menge der Lichtstreuung durch die Zellen in einer flüssigen Kultur verursacht. Eine Maschine namens ein Spektrophotometer leitet einen Lichtstrahl durch einen klaren Röhre eine Bakterienkultur enthält. Da die Zahl der Zellen in einer Kultur ansteigt, wird mehr Licht gestreut und weniger davon tritt durch das Rohr auf der anderen Seite aufgezeichnet werden.

Trübung wird als Extinktion ausgedrückt und als optische Dichte (OD). Je höher die Zahl (zwischen 0 und 2), desto mehr werden die Zellen in der Lösung konzentriert.

Ein anderer Weg, um indirekt die Anzahl von Zellen abzuschätzen, ist die Stoffwechselaktivität der Probe für ein bestimmtes Substrat zu messen. Auf diese Weise wird die Menge der erzeugten Abfälle - entweder ein Gas, das erfasst und gemessen werden kann oder ein Metabolit, der mit einem Indikator in den Medien verwendet werden können - können verwendet werden, um zu berechnen, wie viele wachsenden Zellen in der Kultur sind.

Die letzte Methode, um indirekt die Anzahl von Zellen abzuschätzen, ist durch das Trockengewicht des Organismus in Kultur zu berechnen. Diese Methode wird häufig mit Pilzen verwendet, die lange fadenförmige Kolonien bilden, die durch Verdünnung nicht leicht aufgebrochen werden. Die Probe wird konzentriert, und die Flüssigkeit wird entfernt. Anschließend werden die Zellen getrocknet und gewogen.